發(fā)酵罐滅菌分為空消和實(shí)消兩部分：
空消：不論是種子罐還是發(fā)酵罐，當(dāng)培養(yǎng)基（或物料）還未進(jìn)罐前對罐進(jìn)行預(yù)先滅菌，稱為空罐滅菌，也稱空消。目的是殺死全部微生物尤其是耐熱芽孢，空罐滅菌要求溫度較高，滅菌時(shí)間較長，確保殺死設(shè)備中各死角殘余雜菌或芽孢
實(shí)消：實(shí)罐滅菌是將培養(yǎng)基置于發(fā)酵罐中用蒸汽加熱，到達(dá)預(yù)定滅菌溫度后，維持一定時(shí)間，再冷卻到發(fā)酵溫度，然后接種發(fā)酵，也稱實(shí)消或分批滅菌。操作關(guān)鍵點(diǎn)為三路進(jìn)汽，三路進(jìn)汽即蒸汽從通風(fēng)、取樣和出料口進(jìn)入罐內(nèi)直接加熱，直到所要求溫度，并維持一定時(shí)間
一：影響滅菌的因素：
①pH值。pH值對微生物耐熱性影響很大，pH為6.0～8.0時(shí)微生物最不易死亡，pH ＜6.0時(shí)氫離子易滲透微生物細(xì)胞內(nèi)；
②培養(yǎng)基的顆粒物大小。當(dāng)培養(yǎng)基中存在較大顆粒物質(zhì)特別是凝結(jié)成團(tuán)的膠體時(shí)，滅菌效果會(huì)受到影響；
③培養(yǎng)基成分。油脂、糖類、蛋白質(zhì)都是傳熱不良介質(zhì)，會(huì)增加微生物耐熱性，使滅菌困難。濃度較高培養(yǎng)基相對需要較高溫度和較長時(shí)間滅菌。高濃度鹽類，色素則減弱微生物耐熱性，故較易滅菌。
二：具體滅菌步驟如下：
（1）打開夾套蒸汽閥，利用蒸汽使罐體溫度上升至75℃～80℃，打開冷凝水排水閥，排凈冷凝水。打開取樣口，使少量蒸汽排出。
（2）待罐內(nèi)溫度上升至80℃～90℃，將空氣過濾器下的冷凝水閥門打開，然后開啟空氣管道蒸汽閥，排凈冷凝水，排水2～3分鐘左右，然后將冷凝水閥門關(guān)小，確保有微量冷凝水緩緩流出。
（3）升溫時(shí)，排氣閥門保持開啟，且罐內(nèi)壓力不低于0.1Mpa，查看各個(gè)管道蒸汽是否通暢，管道內(nèi)部要保持一定的壓力，避免出現(xiàn)滅菌死角。
（4）溫度達(dá)到121℃時(shí)，略微開啟接種口，使少量蒸汽排出即可。應(yīng)經(jīng)常調(diào)節(jié)排氣閥和進(jìn)氣閥，使罐內(nèi)壓力維持在0.1Mpa左右，持續(xù)20分鐘。
（5）等待滅菌結(jié)束，關(guān)閉接種口、補(bǔ)料口、接種排氣閥、夾套蒸汽閥、最后關(guān)閉進(jìn)氣口下的蒸汽閥（快速關(guān)閉，注意管道內(nèi)的壓力），再緩緩開啟進(jìn)空氣閥，引進(jìn)無菌空氣，開啟空氣過濾器下方的冷凝水閥，使空氣過濾器降溫，待空氣過濾器冷卻完畢，再關(guān)閉此閥門。期間保持罐內(nèi)壓力在0.02Mpa以上。
（6）待溫度降至100℃以下，關(guān)閉排污閥、開啟冷水閥或自來水閥、開啟回水閥。使用控制面板，設(shè)置自動(dòng)調(diào)節(jié)溫度37℃。待溫度降至40℃時(shí)，停罐。
三：滅罐注意事項(xiàng)：
滅菌過程中要堅(jiān)持下進(jìn)（進(jìn)蒸汽），上出（排氣）的原則。調(diào)整閥門蒸汽大小，按大閥門開小、小閥門開大的原則，從各路進(jìn)蒸汽管道進(jìn)蒸汽給料液升溫。升溫時(shí)排氣閥應(yīng)開啟，保持流通，避免罐內(nèi)出現(xiàn)假壓力。夾套不能進(jìn)冷卻水，滅菌過程中要保持夾套排氣管路不能有冷卻水；滅菌恒溫過程中接種口和移種管路排氣；恒溫過程中液面要翻騰，防止假壓力。
